| 更新時(shí)間： | 2023-06-29 |
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| 廠(chǎng)商性質(zhì)： | 生產(chǎn)廠(chǎng)家 |
豬偽狂犬病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）*中垂詢(xún)！
豬偽狂犬病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：豬偽狂犬病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱(chēng)：Diagnostic Kit For Antibodies To
Swine Pseudorabies Virus（PRV Ab）,ELISA
【規格】
96T×2/盒
【預期用途】
本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬偽狂犬病毒抗體。可用于評估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬偽狂犬病毒的流行病學(xué)調查、豬群豬偽狂犬病毒疫苗免疫狀況分析。但試劑盒所測結果不能用于作為區分免疫抗體和感染抗體的指標，若想確認是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結合臨床資料、免疫狀況及其他診斷方法綜合進(jìn)行分析。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬偽狂犬病毒抗原的微孔反應板、辣根過(guò)氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRV-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應顯色。顯色深淺與PRV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經(jīng)酶標儀檢測所得結果超過(guò)設定的臨界值時(shí)結果判為陽(yáng)性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要組成成份】
1 | PRV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | PRV-IgG陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | PRV-IgG陽(yáng)性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
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10 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
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【自備器材】
1．酶標儀，雙波長(cháng)450/630nm濾光片
2．精q的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．洗液吸移裝置
6．一次性槍頭（10ul，200ul）
7．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存應不超過(guò)一周，長(cháng)期應在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(cháng)菌及含疊氮鈉血清樣本。
3．樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗。
【實(shí)驗準備】
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗前，先取出置室溫30min，可以獲得j結果。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（加入樣本后溶液顏色會(huì )有變化），稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍，即可使用。
【檢驗方法】
1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時(shí)，設陰、陽(yáng)性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽(yáng)性對照血清100μl于相應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。
2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿(mǎn)反應板孔，無(wú)需靜置，直接甩出，洗滌3次，后一次洗滌后吸干板內液體。
4．加酶：每孔加酶標記物100μl。
5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數。
9．讀數：以450nm/ 630nm雙波長(cháng)檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結果判定】
在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽(yáng)性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽(yáng)性對照孔平均OD450/630值；
當樣本的S/P≥0. 2時(shí)判為陽(yáng)性；樣品S/P值＜0.2時(shí)判為陰性；
樣本中抗體相對水平——效價(jià)（ET），其與S/P的關(guān)系如下：
lg（ET的倒數）==0.7628x + 1.5468
x=S/P值。
此效價(jià)是根據實(shí)驗室目前對PRV檢測方法和免疫的抗體反應兩方面綜合而定；在免疫時(shí)效檢測和記錄有代表性樣本的抗體效價(jià)是對豬群的免疫狀況的hao評價(jià)，得出的豬群狀況可對免疫全程中抗體滴度的分布和變化進(jìn)行分析。
若進(jìn)行大量樣本檢測時(shí)，可使用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數據結果，該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載。
【檢驗結果的解釋】
1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽(yáng)性；有血脂樣沉淀或長(cháng)菌的樣本可能導致假陰性。
2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(cháng)短等因素可能會(huì )出現個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測結果為陰性。
3．陽(yáng)性結果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調查時(shí)需結合其他診斷方法和臨床資料進(jìn)行分析。
【產(chǎn)品性能指標】
1．特異性：以本品檢測參比血清，符合率達100%。
2．靈敏度：本試劑盒檢測方法的靈敏度G可達1：5120。
3．重復性：不同批次間CV（%）不高于8%。
4．穩定性：試劑盒在2℃～8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天，測定結果達到以上1-3標準。
【注意事項】
1．本試劑盒僅供研究使用。
2．不要使用過(guò)期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。
3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。
4．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
6．若20倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37℃至溶解后即可。
7．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。
8．加洗滌液時(shí)應做到滿(mǎn)而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號】
詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。
豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒
豬偽狂犬gE鑒別抗體檢測試劑盒
高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測
